Sfondate
Melanotan I, cunnisciutu ancu Afamelanotide, hè un polipeptide lineale cumpostu di 13 aminoacidi chì hè pronta à ghjucà un rolu sempre più significativu in a ricerca farmaceutica. I nomi primari inglesi per Melanotan I sò Melanotan-1 è Afamelanotide. Cum'è un analogu sinteticu di α-MSH, l'hormone α-melanocyte-stimulating), Melanotan I pò esse usatu per trattà i disordini di fotosensibilità causati da protoporfiria eritropoietica. Attualmente, a maiò parte di i prudutti Melanotan I sò etichettati solu per l'usu di ricerca è ùn sò ancu destinati à l'applicazione umana. In a sintesi tradiziunale in fase solida, a scelta di resina hà un impattu significativu in l'efficienc di l'accoppiamentu è a purezza finale di u pruduttu.
Infurmazione basica
Nome cinese: Melanotan 1
Nome inglese: Melanotan-1
Cumpagnia No.: GT-A006
CAS No.: 75921-69-6
Sequenza: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Formula Molecular: C78H111N21O19
Pesu Molecular: 1646,88
Metudu di preparazione
I. Preparazione di Fmoc-Val-Amino Resin
Passu 1:Pesa 11,11 g (5 mmol) di resina Ramage Amide AM cun un gradu di sustituzione di 0,45 mmol/g è aghjunghje à un reactore in fase solida. Aghjunghjite DCM per gonfià a resina per 30 minuti, dopu scorri. Lavà trè volte cù DMF. Aggiungere una soluzione DMF contenente 20% di piperidina (v/v) e reagire per 5 minuti. Aghjunghjite una altra soluzione di piperidina DMF di 20% è reagisce per 10 minuti, cù un lavatu DMF trà. Dopu chì a reazione cumpleta, sguassate è lavate trè volte cù DMF.
Passu 2:Sciogliere 5,09 g di Fmoc-Val-OH, 2,02 g di HOBT (1-idrossibenzotriazolo) e 2,32 ml di DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimide) in DMF a 0 °C. Dopu a dissoluzione completa, aghjunghje a mistura à a colonna di reazzione è reagisce à a temperatura di l'ambienti per 1 ora. Monitorà u prugressu di a reazione cù a prova di ninidrina, assicurendu un risultatu negativu. Dopu chì a reazione hè finita, lavate trè volte cù DMF per ottene a resina Fmoc-Val-amino.
II. Preparazione di Peptide Resin Fully Protected of Melanotan I.
Passu 1:Aggiungere 20% di piperidina in soluzione DMF (rapporto di volume) a Fmoc-Val-aminoresin sopra. Reagisce per 5 minuti, dopu aghjunghje una altra parte di 20% piperidine in suluzione DMF è reagisce per 10 minuti. Lavate una volta cù DMF durante l'intervallu. Dopu chì a reazione hè cumpleta, secca sottu vacuum è lavate trè volte cù DMF.
Passu 2:Scioglie 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-idrossibenzotriazolo) e 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimide) in DMF a 0 °C. Dopu a dissoluzione completa, aghjunghje a mistura à a colonna di reazzione è reagisce à a temperatura di l'ambienti per 1 ora. Monitorà u prugressu di a reazione cù a prova di ninhydrin (test Kaiser) finu à ottene risultati negativi. À a fine, lavate trè volte cù DMF per ottene Fmoc-Pro-Val-aminoresin.
Passu 3:Dopu à u metudu descrittu in u Passu 2, sequentially couple ogni aminoacidu secondu a sequenza di Melanotan I. Dopu a cumpiimentu di a reazione di accoppiamentu Ac-Ser(tBu)-OH, lavate trè volte cù DMF, trè volte cù DCM (dichloromethane), è trè volte cù metanol. Asciugà sottu u vacuum per ottene 23,89 g di peptide Melanotan I di resina cumplettamente prutetta.
III. Preparazione di Melanotan I Crude Peptide
23,89 g di peptide Melanotan I resin-bound cumplettamente protetti sò stati posti in un flask à fondu tondu. À 0 ° C, 250 ml di un cocktail di cleavage pre-preparatu (cumpostu di TFA: thioanisole: phenol: triisopropylsilane: water = 82.5: 7.5: 5: 3: 2 in volume) hè stata aghjunta lentamente sottu agitazione. A mistura hè stata reazzione à a temperatura bassa per 0,5 ore, seguita da a reazione à a temperatura di l'ambienti per 2 ore. A suluzione di cleavage hè stata poi filtrata sottu vacuum. Questa suluzione hè stata aghjunta lentamente à 2 L di etere dietilicu anidru di ghiaccio sottu agitazione. U peptide crudu hè statu isolatu da filtrazione, lavatu trè volte cù etere dietilicu ghiacciatu, è 8,55 g di Melanotan I peptide crudo hè stata ottenuta.
IV. Preparazione di Melanotan I Purified Peptide
Passu 1:Dissolve u peptide Melanotan I crudu in 100 ml d'acqua purificata è filtrà attraversu una membrana di 0,45 μm per ottene una suluzione di peptide crudo.
Passu 2:Purificate u peptide Melanotan I crudu cù cromatografia liquida d'altu rendiment (HPLC). Utilizà una colonna di compressione assiale dinamica DAC-HB50 cù a fase mobile A (soluzione acquosa di l'acidu trifluoroacetic 0,05%) è a fase mobile B (acidu trifluoroacetic 0,05% in acetonitrile). Eseguite l'eluzione di gradiente per a separazione è a purificazione. Detect u campione utilizendu un detector UV è raccoglie a suluzione di peptide currispondente à u piccu di destinazione in frazioni.
Passu 3:Dopu a purificazione HPLC, uttene 180 ml di suluzione di trifluoroacetate Melanotan I cù una purezza chì supera u 99%. Concentrate a suluzione à 50 ml per evaporazione rotativa.
Passu 4:Equilibrate a colonna di cromatografia cù acqua deionizzata è carica 50 ml di a suluzione purificata di Melanotan I trifluoroacetate (purità> 99%). Eluite per 50 minuti in un sistema di soluzione acquosa di l'acidu acìticu 2%. Concentrate u pruduttu di destinazione cullatu à 80 ml via evaporazione rotativa. Eseguite l'asciugatura di pre-freeze è l'asciugatura di congelazione per ottene in fine 5,33 g di peptide purificatu Melanotan I, cù un rendimentu di 32,33%.
Postu tempu: 2026-01-05