U principiu di travagliu è a preparazione di u reattivu Limulus tripeptide / Endotoxin Substrate

U tripeptide di reattivu Limulus hè una sustanza tripeptidica cù una sequenza specifica estratta da lisatu di cellule di sangue di granchi di cavallu o sintetizzati artificialmente. U tripeptide di reagentu Limulus hè un sustrato cromogenicu utilizatu per l'analisi quantitativa (cum'è a prova di l'endotossina bacteriana) per detectà è misurà i cumpunenti di batteri Gram-negativi.—endotossine. Quandu agisce nantu à l'enzimi attivati ​​da l'endotossine, un compostu culuratu (cum'è p-nitroaniline) hè liberatu, chì permette a intensità di u culore per esse misurata è correlata cù u cuntenutu di l'endotoxin.

Principiu di travagliu

Attivazione di l'endotossine: In presenza di endotossine, l'amebociti in l'enzimi di liberazione di sangue di granchi di cavallu, attivanu cusì a cascata di coagulazione.

Azzione Enzimatica: L'enzima attivata (di solitu l'enzima di coagulazione) agisce dopu nantu à un sustrato cromogenicu.

Reazione Cromogenica: L'enzima scinde u sustrato, liberendu un compostu giallu chjamatu p-nitroaniline (pNA).

Analisi Quantitativa: L'intensità di u culore giallu hè proporzionale à u cuntenutu di l'endotoxina in a mostra è hè generalmente misurata cù un spettrofotometru à una assorbanza di 405 nm.

I metudi di preparazione

U tripeptide reagent Limulus pò esse acquistatu attraversu dui approcci in termini di preparazione.

1. Estrazione di cumpunenti naturali da e cellule di sangue di Limulus è ottene u tripeptide attivu attraversu a separazione è a purificazione.

2. Usendu a tecnulugia di sintesi in fase solida per cunnette in sequenza sequenze di aminoacidi specifiche, cuntrullendu precisamente a struttura di u tripeptide.

A causa di e pulitiche di cunservazione per Limulus (cù pruvince cum'è Zhejiang, Fujian, Guangdong è Guangxi chì l'hanu listatu cum'è una "fauna acquatica salvatica protetta di chjave provinciale" / Hong Kong hà publicatu regulamenti à a fine di u 2012 chì pruibisce a pesca di fondu), è perchè u prucessu di estrazione hè cumplessu è sfida, u costu di u primu metudu hè relativamente altu. Dunque, a sintesi in fase solida hè oghji comunmente usata. Cunnettendu sequenzialmente sequenze di aminoacidi specifichi, a struttura di u tripeptide pò esse cuntrullata precisamente. Stu metudu ùn solu assicura a stabilità è a coherenza di u pruduttu, ma permette ancu a pruduzzione à grande scala, risponde à i bisogni di l'industria farmaceutica per a prova di reagenti.