Tecnulugia di peptide FRET

Trasferimentu di energia di risonanza di fluorescenza (FRET)

U trasferimentu di energia di risonanza di fluorescenza (FRET) hè un prucessu di trasferimentu di energia non-radiativa in u quale l'energia di u statu eccitatu di u donatore hè trasferita à u statu eccitatu accettatore attraversu l'interazzione di coppie elettriche intermoleculari.Stu prucessu ùn implica micca fotoni è ùn hè dunque micca radiativu.Questa prova hà i vantaghji di esse veloce, sensibule è simplice.

U tintu utilizatu in l'analisi FRET pò esse identica.Ma in a maiò parte di l'applicazioni, diversi tinti sò veramente usati.In breve, u trasferimentu di l'energia di risonanza luminosa hè u trasferimentu di un paru di dipoli da u donatore (colore 1) à l'accettore (colorante 2) quandu u gruppu di donatore hè eccitatu.In generale, u spettru di emissioni di u gruppu di fluoroforu Donor si sovrappone cù u spettru di absorption di u gruppu Acceptor."Quandu a distanza trà i dui fluorofori hè appruvata (10 - 100 A), u trasferimentu di l'energia fluorofora da u donatore à l'accettore pò esse osservatu.U metudu di trasferimentu di energia dipende da a struttura chimica di u receptore:

1. Hè cunvertitu in vibrazione moleculare, vale à dì, a luce luminosa di u trasferimentu d'energia sparisce.(U receptore hè un quencher di luce)

2. L'emissione hè più intensa ch'è u receptore stessu, risultatu in un redshift in u spettru di fluoriscenza secundariu ".(I recettori sò emettitori luminosi).

U gruppu di donatori (EDANS) è u gene accettore (DABCYL) sò uniformi ligati à u sustrato naturali di a proteasa di HIV, è quandu u sustrato ùn hè micca disconnected, DABCYL pò quenle EDANS è poi diventa indetectable à fluoru.Dopu à a disconnessione di a proteasi HIV-1, EDANS ùn hè più spenta da DABCYL, è i luciferasi EDANS ponu esse rilevati dopu.A dispunibilità di l'inhibitori di proteasi pò esse monitorata da cambiamenti in l'intensità di fluorescenza di EDANS.

I peptidi FRET sò strumenti convenienti per studià a nonspecificità di peptidase.Siccomu u so prucessu di reazione pò esse monitoratu continuamente, furnisce un metudu convenientu per detectà l'attività enzimatica.U splendore pruduciutu dopu l'idrolisi di i legami peptidici da u donatore / accettatore furnisce una misura di l'attività enzimatica à cuncentrazioni nanomolar.Quandu u peptide FRET hè intactu, mostra una sparizione brusca di u lampu internu, ma quandu ogni ligame peptide oppostu à u donatore / accettatore si rompe, libera un lampu, chì pò esse rilevatu in modu continuu è l'attività di l'enzima pò esse quantificata.